将玻璃板洗净、晾干、固定。按照试验要求，配制4%的浓缩胶和10%的分离胶，凝胶配制体系如表3-2所示。胶板制好后，用1ml枪吸水冲洗加样孔。将电泳槽与电泳仪连接好，加入Tris-甘氨酸电极缓冲液，检查电路连通状况，进行SDS-PAGE垂直板电泳，上样量为10L，浓缩胶电泳过程恒定电压80v，分离胶120v待嗅酚蓝到达底时停止电泳，轻轻取出凝胶，切角作记号。然后将胶片转移至大平皿中染色，用0.1%的考马斯保水剂前先将蜡块进行修整，要求修后的蜡块上下边线平行。采用轮转式保水剂机保水剂，保水剂厚度为10m。贴片前，经处理的载玻片应先涂上一层甘油蛋白胶粘贴剂，以免在脱蜡和染色过程中脱片。把保水剂置于盛有温水的大烧杯中，蜡片因受热而伸展，载玻片进行贴片后置500C温箱内烘干。如表3-4所示，随着冻藏时间的延长，闭壳肌解冻损失率逐渐增大。经方差分析，未处理组闭壳肌解冻损失率随时间变化显著(pG0.05)，冻藏至90d时最高，为16.83%;磷酸盐类保水剂处理后的闭壳肌解冻损失率变化不明显，均能保持浸泡时的部分增重量;无磷保水剂处理组，50d,90d时的解冻损失率与。30d的解冻损失率比较，差异显著，90d时最高，为一2.89%，但仍保持部分浸泡增重量。冻藏期间，闭壳肌组织表面的结晶升华形成水蒸气压差，发生干耗，闭壳肌质量减轻;同时，闭壳肌蛋白质变性，保水性下降，解冻损失率升高。对同一时间闭壳肌的解冻损失率进行方差分析，发现不同保水剂间差异不明显(p>0.05)，与未处理组比较，3%的市售磷酸盐、复配磷酸盐保水剂以及无磷保水剂均能显著降低闭壳肌解冻损失率，提高闭壳肌保水性。如表3-5所示，未处理组闭壳肌蒸煮损失率随冻藏时间的变化显著，90d时蒸煮损失率高达55.87%。保水剂处理组闭壳肌，冻藏前30d内，蒸煮损失率变化不明显，第50d后蒸煮损失率显著升高，90d时最高。同一时间，保水剂处理组蒸煮损失率显著低于未处理组(pG0.05)。研究认为磷酸盐通过破坏肌原纤维结构，使肌球蛋白从肌原纤维网状结构空间中脱离出来，在加热过程中，游离出来的肌球蛋白形成凝胶，可固定更多的水分，蒸煮损失率低。而无磷保水剂组分通过保护蛋白质空间构象、抑制蛋白变性来降低蒸煮损失。www.xinglongchem.net